D-荧光素钾盐 CAS#:115144-35-9_上海科远迪生物科技有限公司

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D-荧光素钾盐

CAS号	115144-35-9
规格	1克	纯度	98%
货号	luc001	货期	现货
品牌	sciencelight	库存	100g
规格	1克
纯度	98%
货号	luc001
货期	现货
品牌	sciencelight
库存	100g
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参考价：￥6000.00 元/克

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货号	品牌	纯度	规格	参考价	货期
luc001	sciencelight	98%	1克	￥6000.00元/克	现货

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详细信息(中文)：
发光原理
哺乳动物生物发光，一般是将Firefly luciferase基因（由554个氨基酸构成，约50KD）即荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，当细胞分裂、转移、分化时, 荧光素酶也会得到持续稳定的表达。基因、细胞和活体动物都可被荧光素酶基因标记。将标记好的细胞接种到实验动物体内后，当外源（腹腔或静脉注射）给予其底物荧光素(D-luciferin，potassium salt，以下均简称荧光素)，即可在几分钟内产生发光现象。所发的光波长在540-600nm。这种酶在ATP，氧存在的条件下，催化荧光素的氧化反应才可以发光，因此只有在活细胞内才会产生发光现象，并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。

结构与性能
荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，并产生发光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时，只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。

(1) 荧光素不会影响动物的正常生理功能。
(2) 荧光素是280道尔顿的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。
(3) 荧光素在体内扩散速度快，可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢，持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光，10min后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约20~30 min后开始衰减，约3h后荧光素排除，发光全部消失，最佳检测时间是在注射后15~35min之间；若进行荧光素静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg，即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。
(4) 观察时间的间隔没有最短限制，只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程，但是上一次底物的残留曲线可以知道，可以控制对下一次观察结果的影响。

储存与运输
一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期运输放在4℃环境。

应用领域
肿瘤，干细胞，药物开发，基因治疗，转基因小鼠，免疫学等等。

详细信息(英文)：
Protocol 1: In Vitro Imaging of MDA-MB-231-luc and HCT116-Luc cells

Materials needed:
MDA-MB-231-luc cells (1 T175 flask)
HCT116-Luc (1 T75 flask)
Trypsin/EDTA
D-Luciferin Firefly, potassium salt（Sciencelight, Catalog# luc001）, 1.0 g /vial,
Sterile water
Complete media for each cell line
96 well black plates (Costar)
Procedure:
A. Luciferin Preparation
1. Prepare a 200X luciferin stock solution (30 mg/ml) in sterile water. Mix gently by inversion until luciferin is completely dissolved. Use immediately, or aliquot and freeze at -20C for future use.
* Note: Reconstitute the quantity of D-Luciferin necessary for an individual experiment.
2. Prepare 2X luciferin (300ug/ml) in complete media. Quick thaw 200X stock solution and dilute 1:100 in complete media (2X solution)
* Note: This working solution should be prepared fresh for each experiment.
B. Cell Preparation and Serial Dilution
1. Trypsinize a flask and resuspend cells in a total of 10ml media.
2. Count cells and adjust cell concentration to 100,000 cells/ml = 10,000 cells/100ul.
3. Perform a serial dilution (1:2) in complete media as follows:
a. Pipette 200 ul cells into well #1 (in duplicate).
b. Add 100 ul media to wells #2-10 (in duplicate) using a multi-channel pipette.
c. Perform 1:2 serial dilution by pipetting 100ul from well #1 to well #2 using a multi-channel pipette, mixing well, then taking 100 ul from well 2 to well 3. Continue dilution to well #10 and discard 100 ul from well #10 after mixing.
C. Imaging Procedure
1. Add 100 ul 2X luciferin to cells in well #1-10.
2. Place plate of cells in the camera system on FOV15cm to view entire plate. Use the Plate Positioner or Alignment Grid to help position the plate.
3. Approximately 2-3 minutes after the addition of luciferin, image plate at 1 minute, 10 bin.
* Note: If using >10,000 cells in well #1, imaging time should de decreased.
D. Data Analysis
1. Apply grid ROI to image; measure photons/well.
2. Export measurements from